Термин "микроскопия" имеет греческие корни. В переводе он означает исследование объектов с применением высокоточных приборов. В последнее время все более популярными стали люминесцентная и электронная микроскопия.
Разрешающая способность
Под ней, как правило, понимают минимальное расстояние, на котором могут находиться четко различимые объекты. От разрешающей способности оборудования будет зависеть степень проникновения в микроскопический мир, возможность рассмотреть размер исследуемого элемента. При большом увеличении границы объектов могут сливаться. Соответственно, существуют определенные пределы, дальше которых приближение элементов бессмысленно.
Метод люминесцентной микроскопии: механизм
При превращении энергии, которую поглощает вещество, в видимое излучение происходит свечение. Его именуют люминесценцией. Это явление связано с тем, что некоторые вещества под воздействием света начинают испускать лучи с другой (как правило, большой) длиной волны. Кроме этого, некоторые объекты, имеющие при нормальном освещении определенный цвет, под влиянием ультрафиолета изменяют свою окраску.
Специфика
Объект, который нельзя увидеть в ультрафиолетовом свете, может излучать яркий блеск, если его обработать специальным веществом. В нем элементы светятся разным цветом в темноте. Сила излучения различна, но, как правило, она небольшая. В этой связи люминесцентная микроскопия эффективна в затемненном помещении. При использовании этого вида исследования объект просматривается в свете, который он сам и излучает. Химический состав тканей, клеток будет влиять на качество изучения. Люминесцентная микроскопия считается в определенной степени гистохимическим исследованием.
Классификация
Люминесцентная микроскопия может быть первичной или вторичной. В последнем случае объект обрабатывается специальными соединениями, дающими свечение. Первичная люминесцентная микроскопия основывается на собственной способности исследуемого элемента излучать свет.
Оборудование
Люминесцентная микроскопия выполняется с применением самых разных устройств. В качестве основного их элемента выступает осветитель. Он оснащается лампой ультрафиолетового излучения. Кроме этого, в устройствах используется набор фильтров. В некоторых приборах их довольно много разной конфигурации. В зависимости от того, какой цвет применяется для возбуждения люминесценции – ультрафиолетовый или синий, между источником света и исследуемым объектом помещают соответствующий фильтр. Поскольку свечение микроскопического элемента энергетически слабее возбуждающего света, оно будет улавливаться только при одном условии. Излишек лучей, отходящих от источника, должна быть отсечен желто-зеленым фильтром. Он размещается на окуляре прибора. Наиболее выраженным эффект люминесценции будет тогда, когда фильтр полностью отсечет лучи, отходящие от светового источника.
Из чего состоит установка в видимом излучении? В ней присутствует яркий световой источник и биологический микроскоп. Между зеркалом прибора и лампой устанавливают сине-фиолетовый фильтр. Это может быть ФС-1, УФС-3 и так далее. Желтый фильтр надевается на окуляр микроскопа. С их помощью на объект падает сине-фиолетовый свет. Он и возбуждает люминесценцию. Но этот свет может мешать увидеть свечение. Поэтому на пути к глазу он отсекается желтым фильтром. Установка освещения производится по методу Келера, с одним исключением. Диафрагму конденсора необходимо полностью открыть. При исследовании важно использовать нефлуоресцирующее иммерсионное масло. Для снижения собственного свечения к нему добавляют нитробензол (2-10 капель/1 г).
Люминесцентная микроскопия: применение в микробиологии
Преимуществами этого вида исследования являются:
- Возможность получения цветных изображений.
- Высокий уровень контрастности самоизлучающих элементов на черном фоне.
- Обнаружение и определение локализации отдельных видов вирусов и микробов.
- Возможность изучения прозрачных и непрозрачных живых организмов.
- Изучение жизненных процессов в их динамике.
Необходимо также сказать, что люминесцентная микроскопия способствует развитию тончайших методов гисто- и цитохимии, экспресс-диагностики.
