Согласно статистике ВОЗ, за 40 последних лет 25 млн человек умерли от СПИДа. Урон от этой инфекции колоссален. Больше всего зараженных оказалось в странах Африки, откуда и пошла эта инфекция. При ВИЧ становится особо актуальной диагностика заболевания. Правда, средств для лечения ВИЧ еще не создано, но рано начатая терапия может удлинить срок жизни пациента и улучшить ее качество.
Диагностика инфекции ВИЧ
ВИЧ-инфекция определяется на разных этапах следующими методами:
- ИФА - иммуноферментный анализ.
- Вестерн-блот.
- ПЦР - полимеразная цепная реакция.
- Экспресс-тесты.
Метод ПЦР был разработан американским биохимиком Кэри Муллисом, который получил за это в 1983 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод в медицине при диагностике всех инфекций считается ведущим в силу своей точности и информативности. ВИЧ в этом плане не исключение.
Суть анализа
Любая живая клетка содержит РНК и ДНК. Эти нуклеиновые кислоты способны к самокопированию и самовоспроизведению. Для каждой инфекции фрагменты ДНК уникальны. В биологических жидкостях эти обломки нуклеиновых кислот циркулируют. Они улавливаются и распознаются специальной аппаратурой - реактором. Это и есть основа метода. Лаборант ведет подсчет этих фрагментов. У ретровируса ВИЧ отслеживают РНК. Даже при единичных копиях вирусных частиц ПЦР может их обнаружить и посчитать.
В качестве исследуемой жидкости чаще всего используется венозная кровь. Специальные компоненты метода вступают в связь с частицами вируса и делают их определяемыми, потому что происходит многократное увеличение найденных фрагментов.
В случае с ВИЧ результат наличия вируса можно получить задолго до того, как появится клиника. Поэтому в силу своей высокой чувствительности ПЦР имеет такое высокое диагностическое значение. Огромный плюс ПЦР заключается в универсальности метода. Инкубационный период инфекции для ПЦР не преграда.
Стоимость исследования
Метод ПЦР – достаточно дорогой. В этом заключается один из его больших минусов. Для его проведения нужна новейшая аппаратура и высокая квалификация врача-лаборанта. В силу сказанного ПЦР-диагностика не выполняется в небольших населенных пунктах. Сдать анализ можно только в специализированных крупных клиниках.
Стоимость определения ДНК ВИЧ в клиниках Москвы от 2 800 рублей, выяснение с помощью ПЦР вирусной нагрузки (РНК вируса в плазме) – от 8 800 рублей, а резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы – от 16 500 рублей. Как видим, цены достаточно высокие. ПЦР можно провести бесплатно в государственных поликлиниках по полису ОМС. Важно, что процедуру можно сделать анонимно. В регистратуре пациент получает номер, по которому он сможет узнать результат. В современных медцентрах имеются личные кабинеты клиентов, куда эти данные будут внесены.
Цели исследования
ПЦР-диагностику на ВИЧ назначают в таких случаях:
- Выявление инфекции у ребенка, рожденного от больной матери или носительницы, чтобы определить внутриутробное инфицирование.
- Если ИФА дал сомнительные результаты (ПЦР на ВИЧ помогает в этом случае поставить окончательный диагноз).
- Для выявления количественного содержания вируса в организме.
- При положительном иммуноблотинге – они с ПЦР дополняют друг друга.
- Тестирование доноров.
- Для ранней диагностики ВИЧ.
- Для определения эффективности и резистентности к АРВТ.
Преимущество указанного анализа и в том, что ПЦР на ВИЧ можно проводить даже детям до года.
Исследование чаще выполняют не для первичной диагностики, а уже в процессе лечения. Первичная диагностика – это серологические исследования (при них определяют уровень антител к ВИЧ). При ложноположительном результате его повторяют – это может быть при низкой вирусной нагрузке.
ПЦР диагностирует ВИЧ, когда еще нет к нему антител. Метод ИФА в этом случае не даст ответа.
А ПЦР на ВИЧ будет уже положительным. Но симптомы данного периода ВИЧ неспецифичны. Пациент сначала долго и безуспешно лечится по поводу ОРВИ у терапевта. Следует иметь в виду, что диагноз ВИЧ только на основании ПЦР не ставится, необходимо прохождение и других комплексных тестов. Метод ПЦР служит чаще вспомогательным для сложных случаев.
Подготовка к анализу
Перед тем как сдать ПЦР на ВИЧ, за 2 дня до анализа нужно не употреблять жирную пищу, алкоголь. Также лучше психически и физически не напрягаться. Если пациенту назначен курс иммуностимуляции, его прекращают за 2 недели до анализа.
Кровь лучше сдавать в утренние часы. Исследовать можно и другие биологические жидкости организма (сперму, секрет вагины), но лучшим материалом является кровь. Слюну, пот, мочу и слезы не используют, так как содержание вируса в них минимально.
Плюсы ПЦР при ВИЧ
Достоинствами метода являются крайне малая вероятность ложноположительного результата, универсальность реакции для любых биологических жидкостей организма. Анализ имеет широкий спектр:
- Один забор крови можно использовать для выявления разных инфекций.
- Методика относится к срочным, результат бывает готов уже на следующий день.
- Достоверность составляет от 85 до 98%.
- Наличие ВИЧ можно определить через 10-14 дней после заражения (антител при этом сроке еще нет).
- Нет возрастных ограничений, проводить можно сразу с момента рождения.
Минусы метода
Недостатки ПЦР заключаются в следующем:
- Дороговизна анализа.
- Необходимо сложное медицинское оборудование.
- Требуется высокая квалификация лаборанта и врача, берущего анализ.
- Реакция высокочувствительна, поэтому погрешность может составить 20%.
- Может получиться ложноположительный результат, если у пациента есть аутоиммунные процессы, онкология, хронические инфекции.
- Необходима особая чистота помещения лаборатории, потому что вирус может попасть в анализ из воздуха. Тогда результат будет неправильным.
Для лабораторий, в которых проводится ПЦР, для улучшения качества диагностики разработаны специальные жесткие меры по системе СанПиНа на внутренний контроль. Кроме того, должны быть соблюдены все правила работы при такой методике:
- Требуется строго следить на информацией на пробирках.
- Перед забором крови вновь посмотреть и удостовериться в назначении анализа.
- Медсестра должна сделать правильную маркировку пробирок.
- Врач-лаборант должен правильно провести все манипуляции с биоматериалом, чтобы не допустить перекрестное загрязнение.
- Тест-система должна быть отличного качества.
Только при соблюдении всех этих условий погрешность в ответе может составить всего около 2% эпизодов.
Длительность анализа
Многие интересуются, через сколько ПЦР на ВИЧ будет готов. Диагностирование длится не больше 8 часов. Ответ пациент может получить уже на следующий день. Экспресс-тестирование выполняют в течение 2 часов.
Достоверность ПЦР
Несмотря на массу преимуществ, ПЦР не считается идеальным методом диагностирования. К нему обращаются в случае необходимости получения скрининговых тестов на наличие ВИЧ в организме.
Когда берут кровь на анализ?
Через сколько сдавать ПЦР на ВИЧ? Достоверный результат можно получить уже при взятии крови через 4-4 дней после предполагаемого инфицирования. Через 2 недели достоверность на ВИЧ составит 98%, а при сроке 5 дней – 80%. Наличие при ПЦР на ВИЧ отрицательного результата будет достоверным, но для абсолютно точного результата проводят и ИФА.
Анализ ИФА будет результативным только при наличии антител к вирусу, это время может занимать от 1-3 месяцев до полугода. Так как ИФА дает вероятность выше (98%-99,9%), ПЦР нельзя назвать 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции. Но зато это единственная методика, при которой не нужно ждать появления антител.
При ВИЧ методом ПЦР можно получить сведения об эффективности АРВТ, о стадии заболевания ВИЧ и количестве ВН (количественная оценка нахождения ВИЧ в организме). Это будет говорить о тяжести и степени изменений.
Сдать анализы на ПЦР при ВИЧ нужно и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не указывает на достоверность ВИЧ-инфицирования клинически.
Сдают анализ не только при заражении и случайной половой связи. Другие поводы:
- Планирование беременности.
- Предстоящая операция.
- Случайная половая связь.
- Некоторые профессии требуют сдачи этого анализа для допуска на работу (педагоги, врачи и другой медицинский персонал).
- Заключенные.
- Больные ТБ.
- Работники МЧС и полиции.
- Вернувшиеся после отпуска из экзотических стран (при желании удостовериться, что нет инфицирования).
- Проститутки.
- Иностранные студенты.
- Наркоманы.
Также к сдаче анализа на ВИЧ может вынудить определенная симптоматика у пациента:
- Резкая потеря веса.
- Диарея, длящаяся больше 3 недель.
- Беспричинное повышение температуры в течение длительного времени.
- Увеличение лимфоузлов.
- Невыясненная причина пневмонии, кандидоза и пр.
Расшифровка анализа – прерогатива лечащего врача, а не лаборанта.
ПЦР или ИФА, что лучше?
При ПЦР-диагностике ВИЧ РНК вируса выявляется и качественно, и количественно. Этот анализ четко идентифицирует конкретный патоген даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых. Биологический материал можно использовать даже в засохшем виде. Минус же в высокой чувствительности ПЦР, когда ложноположительный результат может дать и присутствие на инструментах или пробирке даже мизерного количества постороннего ДНК.
Задача и возможность ИФА – определение наличия антител к ретровирусу. Хотя его точность 99%, на ранних стадиях он неприменим.
Качественный анализ на ВИЧ
Проведение качественного ПЦР на ВИЧ определяет присутствие вируса в организме. Результаты в этом случае будут выглядеть следующим образом: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но данное исследование не даст сведений о количестве ретровируса. Такой качественный анализ нецелесообразен тогда, когда уже выявлена ВИЧ-инфекция в организме другими способами.
Контролировать результативность лечения качественным ПЦР невозможно.
Количественный анализ на ВИЧ
Проводится уже только ВИЧ-инфицированным с целью подсчета количества копий РНК вируса в биопрепарате.
Цель такого исследования - мониторинг проводимого лечения и выявление резистентности вируса к нему. Противовирусная терапия в таких вычислениях не назначается врачом вслепую, поэтому будет являться более эффективной. Количественный ПЦР на ВИЧ-инфекцию делают гораздо чаще. Отображается этот анализ копией/мл крови.
Какие результаты могут быть выданы:
- РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл). Нет достоверности диагноза.
- От 20 – до 10 в 6 степени копий/мл – диагноз достоверный.
- Более чем 10 в 6 степени копий/мл - большая ВН.
Лаборатории могут выполнять анализ ПЦР на ВИЧ в режиме Real-time. Это подразумевает наблюдение и численную оценку накапливания продуктов ПЦР при автоматической фиксации результатов.
