Иммунохроматографический анализ: сущность метода

Что представляет собой иммунохроматографический анализ (ИХА)? Разберемся подробнее в этом вопросе.

ИХА – иммунохимический способ анализа, который основан на методе тонкослойной хроматографии. Он включает реакцию между соответствующим антителом и антигеном в биологических материалах. Осуществляется посредством особых тест-полосок, тест-кассет или панелей. ИХА – это экспресс-тест.

Сущность данного метода исследования

Действие его основывается на том, что при погружении в биологическую жидкость (либо другой жидкий образец) теста она начинает двигаться вдоль полоски по методу тонкослойной хроматографии. Движутся вместе с ней нанесенные на нее специфические меченые антитела, которые связываются аффинно с анализируемым компонентом.

Различаются два формата анализа: прямой и конкурентный метод.

Прямой метод

В формате сэндвичного (прямого) иммунохроматографического анализа крови используется конъюгат антитела-метки, который наносится для конъюгата на мембрану. Иммобилизованные антитела на полоске, обладающие конкретным аналитом, на контрольной линии – антитела антивидовые, специфические к антителам первичным.

При внесении образца, в котором содержится конъюгат (искомое вещество), на мембрану, связывается искомый компонент с конъюгатом Ат-метки. После этого сформированный иммунный комплекс проникает в тестовую зону, где происходит связь со специфическими антителами, и образуется «сэндвич» Ат- Аг-Ат-метка. Затем чрезмерное количество не связавшегося конъюгата соединяется на контрольной линии с антивидовыми антителами. Если на тест-полоске появляются две линии, то результат теста положительный. Если аналит отсутствует в образце, то связывается конъюгат с антивидовыми антителами лишь на контрольной линии, и образуется одна линия.

Прямой ИХА применяется для определения возбудителей инфекционных патологий, вирусов – высокомолекулярных соединений, включая разные гормоны, ВИЧ.

Конкурентный метод исследования

Способ конкурентного иммунохроматографического анализа применяется для установления низкомолекулярных соединений. Основан он на конкуренции иммобилизованного конъюгата аналит и аналита: носитель-белок за ограниченное число центров связывания периферических антител, которые содержатся в конъюгате Ат-метка. Когда наносится образец, содержащий аналит, то последний связывается на мембране с конъюгатом с конъюгатом Ат-метка. Иммунокомплекс в дальнейшем проходит через тестовую зону, в которой иммобилизуется конъюгат аналит, то есть белок-носитель.

С этим конъюгатом не может связаться иммунокомплекс из-за стерических сложностей: низкомолекулярные соединения чаще всего обладают одной антигенной детерминантой, таким образом, у иммуноглобулинов есть один центр связи с антигеном, который уже занят до этого аналитом. Иммунный комплекс впоследствии связывается антивидовыми иммуноглобулинами, которые находятся на контрольной линии. Если в тестовой области отсутствует окрашенная полоса и есть окраска в контрольной зоне, это говорит о том, что содержание определяемого компонента в исследуемом образце выше порогового значения для такого теста. Если в аналите отсутствует анализируемое вещество в образце, то происходит связь конъюгата Ат-метка с конъюгатом Аг: носитель-белок, иммобилизованный в области тестовой линии. Ат-метка свободный конъюгат попадает в сферу контрольной линии, где связывается с антивидовыми антителами. Если есть две окрашенные линии (контрольная и тестовая), то можно говорить об отрицательном результате теста.

Метод конкурентного ИХА применяется для определения низкомолекулярных соединений, включая тканевые экстракты.

Преимущество такого способа – легкость и быстрота использования, возможность применения неприборных методов ИХА с оценкой результата визуально. Не требуется дополнительное оборудование, и анализ может провести человек без медицинского образования в любое время.

Какие применяются метки в ИХА?

В иммунохроматографическом анализе в качестве меток применяются разные частицы и вещества.

• Красители (частицы крашеного латекса, или наночастицы углерода, или коллоидного золота). Такой вариант позволяет визуально отслеживать результат или определить колориметрическим прибором. Применение красящих меток, которые присоединяются к носителю, позволяет делать мультианализ, где разноцветные линии соответствуют разным аналитам. Используемой меткой чаще всего выступают наночастицы золота коллоидного.

• Связанные ковалентно с латексными частицами биолюминесцентные, фосфоресцентные и флуоресцентные метки. Применяются лишь в приборных способах ИХА, в которых регистрируется результат особым ридером. Наиболее распространенными являются флуоресцентные метки.
• Парамагнитные метки, закрепленные на латексных частицах. Метод применяется в ИХА с использованием приборов, которые регистрируют силу магнитного поля.
• Липосомы, используемые в качестве носителей разных меток (электроактивных, ферментативных, флуоресцентных, красящих и т. д.) Это новое направление среди разновидностей анализа.
• Ферментные метки, применяемые по принципу ИФА. Регистрация реакции проводится посредством окрашивания субстратов. В итоге получается визуальный результат, либо считывается ридером.

Преимущества данного метода исследования

Главными преимуществами применения метода иммунохроматографического анализа становятся:

• Удобство и простота – позволяет получить результат (первичное представление и анализ причины болезни) без специальных навыков и оборудования.
• Надежность – достоверность тестов достигает 99,8 %, каждый тест при этом имеет внутренний встроенный контроль.
• Анонимность – это особенно важно при определении болезней, передаваемых половым путем, прочих инфекционных болезней, а также установлении употребления наркотических веществ.
• Экономичность – приобрести тест может каждый, экономится время на проведение анализа.
• Независимость – не нуждается в предварительной консультации и рецепте врача.

Тест на наркотики как проводится: особенности и недостатки ИХА-метода

Самой популярной услугой становится анализ мочи на наркотики посредством метода иммунохроматографического анализа. Это позволяет исследовать мочу на 14 видов нарковеществ.

Иммунохроматографический анализ на наркотики также считается экспресс-методом диагностики. Результат теста можно узнать спустя 15 минут. Для проведения данного исследования используют особые тест-полоски, которые пропитаны веществами-индикаторами. Если в моче имеются следы наркотического вещества, цвет полоски меняется. Основной недостаток такого анализа – невозможность определить, какова концентрация вещества и степень наркотического опьянения, таким образом, результаты иммунохроматографического анализа в качестве доказательства в суде использовать не получится.

Каков результат такого анализа?

Если на индикаторах появились две розовые полосы, то делается заключение, что в моче не содержится наркотик, или же его концентрация недостаточна для определения иммунохроматографическим методом. При возникновении одной розовой полосы можно говорить о наличии наркотического вещества: марихуаны, производных эфедрона, опиатов, производных барбитуровой кислоты, амфетаминов, кокаина, фенциклидина, бензодиазепинов, экстази.

Какие можно сделать выводы?

Иммунохроматографический анализ (экспресс-тест) является эффективным средством диагностики, он позволяет визуально на протяжении нескольких минут выявить и оценить концентрацию антигенов, гормонов, антител и других диагностически важных компонентов в человеческом организме. Экспресс-тесты имеют высокую степень точности и чувствительности, обнаруживается более ста видов болезней, а также весь спектр наркотических веществ, и достоверность анализа очень высокая.