Современная медицина обладает методами специфического диагностирования, которые дают возможность устанавливать этиологию заболеваний у людей на основании определения возбудителя, генетически чужеродных веществ, что стимулируют иммунную реакцию, нуклеиновых кислот, а также сдвигов аллергического и иммунного характера, которые происходят из-за его действия. Сегодня в иммунологии и вирусологии широко применяется РИА, то есть радиоиммунный анализ, цели постановки, компоненты, ход, учет которого, мы рассмотрим в данной статье. Этот анализ способен определять антигены в результате их взаимодействия с антителами.
Определение
РИА представляет собой такой метод диагностирования биологически активных веществ в жидкостях, в основе которого лежат реакции антигенов с антителами при применении меченых радионуклидами аналогичных им веществ, которые имеют особые системы связывания. После их взаимодействия образуется иммунный комплекс, который отделяют и изучают его радиоактивность. Известно, что радиоиммунный анализ проводится при помощи стандартных наборов реагентов.
Каждый реагент способен определить концентрацию одного конкретного вещества. Биологическая жидкость, взятая у человека, смешивается с реагентом, по прошествии периода инкубации происходит разделение свободного и связанного радиоактивного вещества, далее проводится радиометрия и расчет результатов. Для метки веществ применяют изотоп йода. Его метят и добавляют в определенном количестве.
Применение
Радиоиммунный анализ применение имеет широкое в медицине и микробиологии. С его помощью проводится диагностика сердечных и сосудистых заболеваний, болезней эндокринной и иных систем организма. Также часто РИА используются для выявления причины бесплодия, патологии развития плода. В онкологии этот анализ проводят с целью определения маркеров новообразований, чтобы иметь возможность контролировать эффективность лечения. В иммунологии РИА применяется для исследования в крови наличия иммуноглобулинов, ферментов, белков и так далее. Сегодня данный анализ позволяет выявлять концентрацию различных гормонов до миллионной части одного грамма. Таким образом, радиоиммунный анализ крови широко применяется в кардиологии, онкологии, эндокринологии, гинекологии и вирусологии.
Методы РИА
Принято различать несколько методов анализа, в зависимости от характера реакции:
- Неконкурентный метод характеризуется такими компонентами реакции, как стандартный и определяемый антигены, буферный раствор, антитела, что помечены изотопом, определенные антитела, что связываются на сорбенте. К антителам добавляют антиген, который исследуется. После инкубации появляются комплексы антиген-антитело, сорбент омывают, добавляют помеченные антитела, что вступают в связь с антигеном в составе комплекса. Радиоактивность зависит от концентрации антигена, что исследуется.
- Конкурентный радиоиммунный анализ обуславливается конкуренцией антигена. Здесь имеются такие компоненты реакции, как контрольный и определяемый антигены, буферный раствор, определенные антитела, что связываются на сорбенте, а также антиген, помеченный изотопом. Диагностирование начинается с ввода антигена, что исследуется. На сорбенте образуется комплекс антиген-антитело. Дальше омывается сорбент, и вводят помеченный антиген. При этом он вступает в связь с антителом. При помощи счетчиков измеряют реакцию и величину радиоактивности. Она будет в обратной пропорции относительно количества антигена в пробе.
- Непрямой метод является самым распространенным. В этом случае радиоиммунный анализ компоненты реакции имеет такие, как контрольная и исследуемая сыворотка, антигены или антитела, которые связаны на сорбенте, антитела, помеченные изотопами, растворы буферов. Антитела или антигены, что диагностируются, вступают в реакцию с антигенами или антителами, которые связаны на сорбенте. Потом удаляют инкубат, вводят помеченные антитела, что вступают в связь с комплексами антиген-антитело.
Методика проведения анализа
Так, радиоиммунный анализ проводится при помощи особых реагентов. Наборы стандартные, поэтому какие-либо погрешности или нарушения не допускаются. Результаты диагностики получаются достоверными. Анализ проводят утром, для этого берут у человека венозную кровь. В лаборатории от крови отделяют сыворотку, которая будет применяться для РИА. Эту сыворотку смешивают с реагентами. Полученная смесь проходит инкубацию при заданной температуре в термостате.
В полученной смеси разделяют свободные и связанные изотопы. После этого полученный материал исследуется, и просчитываются результаты. Механизм радиоиммунного анализа имеет несколько вариантов. Методика, что описана выше, является РИА жидкофазным, так как все компоненты имеют жидкое состояние. Есть РИА и твердофазный, где антитела кладут в носитель, который не растворяется в жидкости.
Доступность диагностики
Использование этого метода диагностики в медицине с каждым годом становится все популярнее. В последнее время радиоиммунный анализ становится стандартным методом диагностики, который может быть назначен врачом при постановке окончательного диагноза. Долгое время этот вид анализа проводился только в лабораториях, сегодня он стал обычным методом исследования. Но РИА требует применения дорогостоящего оборудования (гамма-счетчиков), а наборы реагентов имеют короткий эксплуатационный срок. Все это является основным недостатком такого анализа, что определяют его дорогую стоимость.
Кроме того, в последнее время РИА стали вытеснять более современные методы исследования, которые не требуют взаимодействия с изотопами. К таким относится иммуноферментный анализ. Таким образом, РИА является желанным во многих клиниках. В больших городах и центрах диагностики он давно используется, но в обычных больницах маленьких городов этот анализ практически не применяется из-за своей дороговизны.
Достоинства РИА
Радиоиммунный анализ имеет множество достоинств. Он достаточно специфичен и имеет высокую чувствительность, что позволяет определить наличие биологически активных веществ в невероятно малых количествах. Проводится этот анализ очень просто, от человека требуется только сдать венозную кровь. Результаты теста получаются точными на все 100% и готовы уже на следующий день. Также РИА с легкостью можно автоматизировать. Таким образом, этот анализ позволяет выявлять белки, которые представляют собой продукты жизнедеятельности инфекционных бактерий, что свидетельствует о наличии инфекции в организме.
Диагностика в вирусологии
Самым перспективным РИА является для вирусологии, поскольку позволяет в короткие сроки выявить вирусных возбудителей. Связано это с тем, что в последнее время растет число заболеваемости различными инфекциями, которые распространяются с большой скоростью, вызывая смертность среди людей. Особенно это касается стран, которые не имеют высокого социального и экономического развития (страны Дальнего Востока), здесь просто незаменим радиоиммунный анализ. Микробиология также применяет этот метод диагностики для выявления инфекционных болезней, которые вызывают патогенные бактерии. Например, РИА широко используют для выявления брюшного тифа. В первые дни недуга до назначения лечения необходимо проведение исследования кала и рвотных масс. Однако результаты диагностирования будут получены через длительное время. Здесь на помощь приходит РИА, анализ позволяет в короткий срок выявить возбудителя заболевания. Человек сдает кровь, на следующий день уже готовы результаты исследования. Этот анализ помогает в постановке точного диагноза.
Итоги
Радиоиммунный анализ является на данный момент одним из самых чувствительных методов диагностирования. Он используется для анализа любого вещества, против которого можно получить антитела. Этот метод дает возможность сделать множество проб в самом маленьком объеме исследуемой жидкости, а также в кратчайшие сроки провести учет результатов, так как он может быть полностью автоматизирован. Этот анализ был разработан в пятидесятых годах прошлого столетия Соломоном Берсоном. Через тридцать лет он получил широкое распространение. На сегодняшний день РИА нет стопроцентной альтернативы, так как анализ имеет высокую чувствительность. РИА используют в различных отраслях медицины, а также в микробиологии и вирусологии.
Напоследок
Использование метода в вирусологии очень актуально сегодня, так как дает возможность исследовать распространение инфекций, поставить точный диагноз и назначить специфическое лечение. Особенно эта проблема актуальна для стран, которые имеют низкий уровень экономики и социального развития. Также этот анализ позволяет выявлять количество гормонов и ферментов в организме человека. Для того чтобы получить достоверные результаты, исследуемому необходимо только сдать кровь на анализ. Медицина не стоит на месте, наряду с радиоиммунным анализом появляются новые методы исследования, но РИА продолжает оставаться одним из ведущих в медицинской диагностике.
