Что собой являет бактериологическое исследование? По какой схеме оно проводится? Что понимается под техникой безопасности в данном случае? Какие цели и этапы бактериологического исследования существуют?
Общая информация
Бактериологическое исследование – это научный процесс, в рамках которого выявляются бактерии и изучаются их свойства с целью постановки микробиологического диагноза. Огромное значение здесь имеет определение типовой или видовой принадлежности полученного микроорганизма (подразумевается чистая культура). Это сопровождается изучением биохимических и физиологических свойств организмов, а также склонности к токсинообразованию. Для этих целей используются
реакции преципитации и агглютинации. Также практикуется заражение лабораторных животных с последующим выявлением патологических изменений.
Работа с исследуемым материалом
Алгоритм бактериологического исследования предусматривает неукоснительное соблюдение специальной инструкции. Так, исследуемый материал необходимо собирать в стерильную посуду в асептических условиях. Также необходимо позаботиться о том, чтобы доставка в лабораторию осуществлялась как можно скорее. Желательным является хранение проб в холоде. Методика бактериологического исследования предусматривает много возможных ситуаций. Так, тип объекта, свойства микроорганизма и характер заболевания заставляют часто разрабатывать индивидуальные инструкции для работы. В работе используется большое количество различных методов. Один из самых распространённых – это бактериоскопия. Но если бактерии нефиксированные, то используют раздавленную или висячую каплю. Следует отметить, что два последних варианта отличаются повышенным уровнем заразности.
Бактериоскопия
В данном случае используются мазки. Для их создания нужно каплю жидкости, которая исследуется, распределить по поверхности предметного стекла. Затес следует высушить её. Для этого часто используют перемещение препарата через пламя, получаемое от газовой горелки. Хотя в качестве альтернативы могут использовать фиксирующие составы. Чтобы обозначить, что с данным препаратом подготовительные действия проведены, его окрашивают. Цель подобной манипуляции - точность, что очень важно, когда проводится микроскопическое и бактериологическое исследование. Ведь если повторно использовать препарат для другой цели, получится каша, эффективно работать с которой будет очень сложно.
Почему бактериоскопия так популярна
Не в последнюю очередь это обусловлено доступностью данного метода. Если проводится бактериологическое исследование свежего препарата, то для определения патогена могут использоваться микрохимические реакции или избирательная окраска различных структурных частей микроорганизма. Что из них лучше? Более точный результат можно получить при работе с окрашенным препаратом. В этом случае исследуемый материал наносят на заранее подготовленное предметно стекло. Причем обязательно тонким (а при возможности и ровным) слоем. После этого необходимо подождать, пока препарат высохнет на воздухе. Затем микроорганизмы фиксируют с помощью одного из общепринятых методов. После этого остуженный препарат подвергают окрашиванию дифференциальной или простой краской. Для этого могут использоваться сухие и нативные препараты. После этого остаётся направить на место скопления организмов ультрафиолетовые или короткие синие лучи, что вызывает свечение всего микроба или отдельных участков его тела.
Практическое применение бактериоскопии
Она используется для того, чтобы диагностировать ряд инфекционных заболеваний. Самыми известными из них являются туберкулёз, гонорея и возвратный тиф. Кроме этого, к исследованию прибегают, чтобы изучать весь комплекс микрофлоры органа или продукта. Но критики часто указывают на относительную ненадёжность и неточность данного метода.
Посевы и пересевы бактериальных культур
Осуществляют их с использованием пастеровской пипетки. Проведение бактериологического и
цитологического исследования часто бывает сложно осуществить без посева и пересева во время рабочего процесса. Когда работа ведётся с пастеровской пипеткой, то её кончик обламывается с помощью пинцета. Сам инструмент после этого проносят через пламя горелки и после этого дают ему остыть. Кстати, при посевах могут использоваться как жидкие, так и твердые
питательные среды. Влияние на выбор оказывает то, какие цели бактериологического исследования преследуются. При этом необходимо придерживаться алгоритма работы и техники безопасности. Так, при работе с жидкой питательной средой необходимо следить, чтобы она не вылилась и не смочила края пробки и пробирок. Когда исследование ведётся с твердым материалом, то часто используют особую иглу для занесения культуры. Когда проводятся посевы и пересевы, они должны осуществляться около пламени газовой горелки. Для чистоты эксперимента пробирка не должна долго оставаться открытой. Насчет инструмента с культурой: следует проследить, чтобы он ни к чему не прикасался. Также техника бактериологического исследования предусматривает прожиг краев пробирки перед её закрытием. Уже готовый препарат следует сразу же после изготовления подписать, чтобы избежать в будущем путаницы.
Результативность посева
Считается, что этот метод позволяет получать более точные и надёжные данные во время бактериологической диагностики, чем рассмотренная ранее бактериоскопия. В этом случае алгоритм действий таков:
- Первоначально чистую культуру размазывают по поверхности питательной среды, которая налита в чашку Петри.
- Первоначальный посев необходимо проводить в условиях, которые являются благоприятными для данного вида микроорганизмов.
- Через сутки-вторые при наличии оптимальной среды все подходящие колонии переселяются туда, где они смогут по максимуму развиваться. Это освобождает их, таким образом, от посторонней микрофлоры.
Конечный результат – это культура однородных бактерий, которые можно идентифицировать.
Чистые культуры
А вот как они получаются? Для этого используются биологические и механические методы. В первом случае большую роль играют питательные среды, где есть необходимые условия, благоприятные для развития определённой культуры. Также может использоваться подход, когда заражаются лабораторные животные, чувствительные к определённому виду бактерий. Механические методы базируются на использовании стерильного инструмента, с помощью которого культура помещается в питательную среду, находящуюся в первой, второй и третьей чашках Петри. Потом необходимо подождать, пока вырастут отдельные колонии, и из них уже будет выделяться чистая культура. Также выращиваться бактерии могут в специальных термостатах, где поддерживается температура определённого уровня (обычно около 37 градусов). В таком случае процесс продолжается около суток. Но, в зависимости от вида микроорганизмов, могут устанавливаться и другие сроки. Также немаловажным является наличие необходимой концентрации кислорода. Для этого используют различные методы аэрации. До сих пор мы говорили о ситуации в целом и общем, а сейчас давайте сосредоточим своё внимание на том, что собой представляет схема бактериологического исследования.
Практика
Комплекс методов часто используется для того, чтобы выявлять
патогенные микроорганизмы в теле больного или потенциального носителя. Используемые материалы и методы зависят от того, какие цели преследует анализ, а также от условия среды, в которой ведётся работа. На практике чаще всего бактерии выявляются благодаря проведению посева крови, взятой у человека или животного. Если хорошо выражены местные поражения, патогены можно искать в проблемных местах. Это характерно для таких недугов, как дизентерия, гонорея, дифтерия, и ряда им подобных. В особо тяжелых случаях этот процесс разбивается на отдельные этапы бактериологического исследования (что характерно для брюшного тифа). На каждом из них используются свои методы, которые направлены на поиск причины заражения. Давайте более детально рассмотрим ситуацию с брюшным тифом. На первой неделе заболевания наиболее достоверным способом диагностирования болезни является посев крови. На второй таковым считается
серологическое исследование. На третьей недели исследуют испражнения. Последним методом считается проверка реконвалесцентов.
Идентификация микроорганизма
Она начинается с процесса его окрашивания. Затем смотрят, как бактерия может расщеплять углеводы, аминокислоты и так далее. Дополнительно этот процесс может быть дополнен изучением иных свойств, которыми обладает каждый отдельный род или вид микроорганизмов. В качестве примера следует привести возможности растворения эритроцитов различных животных, влияние на свертываемость плазмы крови и растворение сгустка фибрина и так далее. Всё это является дифференциальными признаками отдельных представителей микромира. Также для окончательного распознавания может использоваться серологическая идентификация (но это, как правило, касается патогенных бактерий, что принадлежат к семейству кишечных).
Заключение
Следует отметить, что ряд микроорганизмов невозможно идентифицировать описанными в статье способами. В таком случае широко используется практика заражения лабораторных животных. Расчет делается на то, что проявится характерная токсигенность или патогенность, которая не наблюдается в искусственных условиях. Также заражение может быть использовано в качестве метода накопления патогенных микробов. И уже когда сопоставлены характеристики исследуемой культуры, обнаруженные в процессе изучения биологических, морфологических, серологических и биохимических свойств, можно говорить о том, что известно, с каким видом микробов мы имеем дело. Под идентификацией подразумевают указание рода, вида и типа бактерии. Если исследуемый микроорганизм отклоняется в определённых свойствах от своей типичной характеристики, то это следует обязательно указать. Ряд специалистов считает, что в таких случаях полезным будет проведение повторной идентификации с дублированием всех используемых методов и приёмов. Иногда исследования могут быть перенесены на новый уровень, который подразумевает более серьезный подход (и более дорогостоящий). Если были получены отрицательные результаты, то это говорит о том, что в препарате микроорганизмы отсутствовали или они были нежизнеспособны. Но для точности исследований при подозрении на ряд бациллоносителей (дизентерия, дифтерия,
брюшной тиф) в таких случаях показаны повторные проверки. Это нужно для того, чтобы специалисты имели точное представление о том, с чем приходится иметь дело.
